产品货号：
BTN16-15700
中文名称：
甲型肝炎病毒RT-LAMP检测试剂盒
英文名称：
Hepatitis A Virus(HAV)RT-LAMP Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本公司根据双染料RT-LMAP技术开发了简单快捷的甲型肝炎病毒RT-LAMP检测试剂盒。
甲型肝炎病毒(HepatitisAvirus，HAV)为小RNA病毒科嗜肝病毒属，人类感染HAV后，大多表现为亚临床或隐性感染，仅少数人表现为急性甲型肝炎。甲肝发病急，有发烧、饭后恶心、呕吐、乏力、小便色似浓茶、部分病人可伴有黄疸和肝功能异常等症状。因此甲型肝炎病毒的快速准确鉴定有重要意义。
保存：-20℃，有效期一年。
一、样品RNA的制备
二、RT-LAMP反应(20μL体系)
三、结果分析
相关搜索：甲型肝炎病毒RT-LAMP检测试剂盒，Hepatitis A Virus(HAV)RT-LAMP Kit
甲型肝炎病毒(HepatitisAvirus，HAV)为小RNA病毒科嗜肝病毒属，人类感染HAV后，大多表现为亚临床或隐性感染，仅少数人表现为急性甲型肝炎。甲肝发病急，有发烧、饭后恶心、呕吐、乏力、小便色似浓茶、部分病人可伴有黄疸和肝功能异常等症状。因此甲型肝炎病毒的快速准确鉴定有重要意义。
- 即开即用，用户只需要提供病毒RNA样品。
- 恒温扩增，可以不需要荧光PCR等贵重仪器。
- 含可见光和荧光染料，既可以用金属浴和水浴扩增用可见光肉眼判断结果，也可用荧光PCR仪进行实时荧光检测。
- 检测灵敏性一般比RT-PCR高10倍以上，分析灵敏度可以达到100拷贝/反应左右。
- 特异性高，根据甲型肝炎病毒RNA保守序列设计4条特异引物，不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。
- 一般30分钟内出结果，比RT-PCR快。
- 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
- 本产品只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。
- 上样量大，对20μL的反应体系，最大样品加样量高达到13μL。
- 内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
- 本产品足够50次20μL体系的染料法荧光及可视化RT-LAMP扩增。
- 只可用于科研。
| 组分 | 规格 |
| RT-LAMP MasterMix(双染料，待加酶) | 200μL |
| 逆转录酶-扩增酶混合液 | 100μL |
| 20×甲型肝炎病毒RT-LAMP引物混合液 | 50μL |
| 甲型肝炎病毒RT-LAMP阳性对照(1×104拷贝/μL) | 250μL |
| 超纯水 | 1mL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、样品RNA的制备
- 用自选方法纯化样品RNA，本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容，包括本公司的免提取的核酸释放剂。
- 如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照(PC)和一个样品制备阴性对照(NC)。PC用10μL本试剂盒提供的阳性对照(1
×104拷贝/μL)加一定量的水充当，总体积必须核酸纯化试剂盒所要求的起始样品体积一样，NC用水替代。
二、RT-LAMP反应(20μL体系)
- 注意：第一次使用一个新的试剂盒时，必须先将100μL逆转录酶-扩增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix(双染料，待加酶)中，盖上盖子后轻柔颠倒1分钟混匀，然后再取用。
- 反应设置：如果有N+2个RNA纯化样品，则最好设置N+4个RT-LAMP扩增，增加RT-LAMP阴性对照和RT-LAMP阳性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：
成分 N+2个
样品管RT-LAMP
阴性对照RT-LAMP
阳性对照RT-LAMP MasterMix(双染料，已加酶) 各6μL 6μL 6μL 20×甲型肝炎病毒RT-LAMP引物混合液 各1μL 1μL 1μL N+2个样品RNA 各13μL - - 超纯水 - 13μL - 甲型肝炎病毒RT-LAMP阳性对照(1×104拷贝/μL) - - 13μL - 本产品含两种染料，故最好使用荧光PCR仪器进行扩增。设置60次循环，每次65℃保温1分钟，采集SYBR通道的荧光信号。
三、结果分析
- 电泳分析：由于取样时非常容易产生气溶胶污染，污染实验环境并且非常难清除污染，所以强烈建议不要采取此方法分析实验结果。即使使用，也要在不同的房间，使用不同的移液枪操作。具体做法是取10μL RT-LAMP扩增产物跟自备上样液混合后进行2%琼脂糖凝胶电泳。RT-LAMP阳性对照必须有正常RT-LAMP条带(200bp左右的梯形扩增产物)，RT-LAMP阴性结果必须无条带，否则实验结果无效。如果RT-LAMP阳性对照和阴性对照结果正常，再分析待测样品。典型的电泳结果见下表，奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果：
- 可将光(肉眼)分析：样品制备阳性对照和RT-LAMP阳性对照的反应液将呈蓝色，样品制备阳性对照和RT-LAMP阳性对照的反应液将呈淡蓝色或无色，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的颜色接近扩增阳性对照管则说明样品为阳性，如果接近阴性对照则说明待测样品为阴性。典型的可将光检测结果见下图(9为阴性，10为阳性)。
- 荧光分析(仅限于用qPCR仪进行反应的场景)：样品制备阳性对照和RT-LAMP阳性对照的反应液将有标准的S扩增曲线，样品制备阴性对照和RT-LAMP阴性对照的反应液将没呈平线，没有S曲线，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。
样品管的荧光曲线为S型，则说明样品为阳性，如果为平线则说明待测样品为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性，右边为阴性。
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